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本试剂盒适用于从福尔马林固定、石蜡包埋组织中有效纯化基因组DNA。本制品使用专门优化脱蜡剂和裂解液，释放福尔马林固定或组织切片样本中的DNA，不涉及有机试剂二甲苯，无需过夜操作；消化后的样品在较高的温度孵育后，去除游离DNA的福尔马林交联，有效提高DNA的产量和纯度；优化的缓冲系统使裂解液中的DNA可特异结合到吸附膜上，抑制剂通过两步漂洗步骤有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。同时配置高效微量吸附柱，洗脱体积可低至20μL。经过纯化的DNA可以直接用于PCR、Real-time PCR、SNP基因分型、STR基因分型、二代测序和药物基因组学研究等。

• 获得样品后，要尽快将样品在4%～10%的福尔马林中固定，固定时间以14～24小时为宜，时间过长易导致基因组断裂，影响下游实验。如果甲醛固定时间过长或样本存放时间过久（＞1年）则易导致DNA完整性受损，无法扩出长片段。
  
• 确保包埋前的样品彻底脱水，残留的福尔马林会抑制Proteinase K的作用。
  
• 向Proteinase K中加入1.25mL Proteinase K Storage Buffer使其溶解，-20℃保存。配制好的Proteinase K勿长时间室温放置，以免影响其活性。
  
• 第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
  
• 使用前请检查Buffer GTL、Buffer GL和Buffer DS是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GTL、Buffer GL和Buffer DS于56℃水浴重新溶解。
  
• 实验开始前将水浴锅或恒温混匀仪预热至56℃，离心机保持25℃。
  
• 如果下游实验需要降低低频发生的C>T|G>A转换（人为突变），将假阳性风险降至最低，可以在90℃孵育1小时后加入7μL UNG（1U/μL），UNG本试剂盒并未提供，如果需要可单独向本公司订购UNG酶(货号：WE0115)。

• 样本处理：
  
  • 石蜡包埋样本：用手术刀将组织块中多余的石蜡修剪掉，露出组织后切成5～10μm的薄片。取约1×1cm2的切片（共约4～5片切片）置于离心管（自备）中，加入160μL Buffer DS，涡旋震荡10秒，再加入180μL Buffer GTL和20μL Proteinase K，涡旋震荡10秒。12000rpm，25℃离心1分钟。
    注意：
    
    • 如果样品表面已经暴露在空气中，请将接触空气的2～3片弃掉不用。
      
    • DS低于18℃会凝固，如果凝固不影响下面的实验。
  • 福尔马林等固定液中的样本：取约20mg的样本，切成小块，置于离心管中，加入500μL 10mM PBS（pH7.4），涡旋振荡，12000rpm离心1分钟，弃上清，重复3次。加入180μL Buffer GTL，20μL Proteinase K，涡旋震荡混匀。
• 56℃孵育1小时，直至样品完全溶解。90℃孵育1小时。12000rpm，25℃离心1分钟，用移液器沿管壁小心吸取下层水相（约180μL）于新离心管中，尽量避免吸入管底沉淀和上层蜡液。
  注意：
  
  • 56℃孵育后的样品可置于室温，直至水浴锅或干浴锅温度达到90℃后再把样品置于90℃孵育。
    
  • 可选步骤：加入7μL UNG（1U/μL），50℃，5min，不震荡。此步骤的目的是降低低频发生的C>T|G>A转换（人为突变），同时有效保留真实发生的突变，从而使假阳性风险降至最低。UNG本试剂盒并未提供，如果需要可单独向本公司订购UNG酶(货号：WE0115)。
• 可选步骤：如需除去RNA，可将样品温度降到室温后，加入2μL浓度为100mg/mL的RNase A溶液，震荡混匀，室温放置2分钟。
  
• 加入20μL Proteinase K，65℃，450rpm孵育15min。
  
• 加入200μL Buffer GL，涡旋震荡混匀后加入200μL无水乙醇，涡旋震荡彻底混匀。短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
  注意：
  
  • 加入Buffer GL和无水乙醇后要立即充分混匀。
    
  • 加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
    
  • 如果需要对多个样品进行操作，可以将Buffer GL和无水乙醇事先混匀后加样。
• 将步骤5所得溶液全部加入已装入收集管的吸附柱DF中，25℃，12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 向吸附柱中加入500μL Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  
• 向吸附柱中加入500μL Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
  注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤8。
  
• 12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟以彻底晾干。
  注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应。
  10将吸附柱置于一个新的1.5mL收集管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20～100μL Buffer TE或灭菌水，室温放置2～5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
  注意：
  
  • 洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0～8.5，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
    
  • 如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，室温放置2分钟，12000rpm离心1分钟。